在同一样品中使用多种荧光染料实验显微镜

在同一样品中使用多种荧光染料实验显微镜
    为了在同一样品中使用多种荧光染料;必须仔细确定每一抗原只能被一种标记试剂识别。最安全的方法就是使用被不同荧光染料标记的第一抗体。染色可以同时进行，但是必须包括进行单独染色的对照样品以用于监测交叉反应。开始最常遇见的是第一抗体没有被标记;而只能通过间接法监侧。在这种悄况下，抗体必须来源于不同的种、纲或亚纲，然后用被标记的第二抗体专一性的识别每一种第一抗体。通常要检测试剂的专一性，因为针对于某一种、纲或亚纲的抗体可能与大量的其他种、纲或亚纲的抗体发生相互反应，除非它们被专一地吸附(多家厂商提供的、来源于其他物种并以固定化的血清蛋白预吸附的第二抗体)。因此要尽可能使用来源于同一物种的第二杭体。例如，当使用一种兔多克隆抗体和一种小鼠的单克隆抗体时，就应当使用产于山羊的血清为阻断剂。另外一项重要的对照实验是监测检测试剂的种间交又反应，.即进行每一种第一抗体与专一性识别区域的第一抗体的第二抗体之间的每一免疫染色实验。    为了减少交又反应，多重染色也可以在固定步骤间连续进行。在涉及两种抗体情况时，例如常常面临来自同一类型的两种小鼠单克隆抗体，则最好有一种直接标记。为了避免可能出现的第二标记抗体与该标记的第一抗体的结合，在连续染色时，最后用标记第一抗体染色的方法也是非常可取的。    总之，为了进行多重标记免疫染色实验，必须注意下而二个垂要标准:    ①所选择的荧光染料必须具有较好的光讲分辨特性。    ②为了避免相互识别，第二抗体必须来源于同一种宿主动物。它们也不能识别所用的其他第一抗体和在检测中存在的其他任何免疫球蛋白.而且他们也不能直接与样品反应。