分离研磨细胞纯化蛋白质生物实验分析显微镜

分离研磨细胞纯化蛋白质生物实验分析显微镜
蛋白质纯化　　
　　重组DNA技术的发展使蛋白质可以在宿主细胞大量表达。蛋白质的表达可以用聚丙烯酰胺凝胶电泳来确认，接下来的问题是如何纯化蛋白质。纯化成功的标志是能够得到大量且纯度很高的蛋白质。同时达到这两个目的很难，通常用经验方法来解决。
　　纯化的第一个步骤是用机械破碎或化学制剂如酶来分离细胞。机械破碎法包括用超声波(超声波频率>20 kHz)破碎膜结构，用很大的压力使细胞通过很小的口从而使细胞膜破裂，以及用研磨材料如沙子或玻璃珠来研磨细胞以使细胞破碎。
　　另一种破碎方法是用酶如溶菌酶来破碎革兰氏阴性菌如大肠杆菌的细胞壁或用几丁质酶来破坏酵母的多糖层复合体。溶菌酶通过裂解在肽聚糖层N一乙酰基胞壁酸与N一乙酰基葡萄糖胺之问的多糖层复合体起作用。复合糖苷键的裂解使细胞膜容易破碎，同时大肠杆菌的细胞膜“sac”在渗透压作用下很容易破，轻微的超声波降解法可以使细胞质释放并通过差速离心法使之与细胞膜分离。
　　通常通过蛋白质的物理性质来分离纯化蛋白质。通过蛋白质的一级结构可以推测蛋白质的全长、二硫键的含量、溶解性、质量及疏水性，并根据这些生物信息用不同的纯化方法来区分相似的蛋白质。但在许多情况下新研究的蛋白质的序列是未知的。为了获得序列信息纯化蛋白质是必需的，但序列信息对于蛋白质的纯化也起很大作用。找出蛋白质的物理性质并用合适的方法可以使我们用少量的步骤从含有多种杂蛋白的细胞裂解物中纯化得到目的蛋白