酶或麦芽糖结合层析生物实验图像显微镜

酶或麦芽糖结合层析生物实验图像显微镜
　　亲和层析
　　一些蛋白质的一个重要的特点是不通过共价作用就可以与配体紧密连接。这个性质被用于纯化，基本原理是配体通过共价作用连接到基质上。当流动相流过柱子时，与配体有强亲和力的蛋白质结合到配体上，它们流过柱子的速度减慢，与配体无亲和力的蛋白质直接流过柱子。这种方法为纯化提供了一种独特的选择途径。亲和层析有一个很大的优点就是利用了蛋白质的生物化学性质而不是蛋白质的物理性质。
　　亲和层析依赖于蛋白质与不移动的配体之间的相互作用。结合必需足够特异以区分不同的蛋白质，但如果结合非常紧密(大的亲和力)，从柱子上洗脱蛋白质也是一个问题。主要的洗脱方法是竞争蛋白质的结合位点。因此，常用的洗脱方法是加入外来的或自由的配体与共价连接的配体竞争与蛋白质的结合位点。第二种方法是改变溶液环境到足够阻碍蛋白质与配体之间的结合。在这些条件下，蛋白质不再表现与配体间很强的亲和力从而被洗脱。后一个方法中不能用可以使蛋白质变性的溶液环境，一般只是适当地改变溶液的pH与离子强度。酶很适合于这种层析方法，协同因子如NAD、NADP和ADP无疑被用作亲和层析中的配体。
　　亲和层析的一个限制因素是必须有办法把配体共价连接到基质上。这一共价修饰又不能破坏它与蛋白质之间的亲和力，还必须在层析过程中使用中性的温度、pH以及溶液环境下使之能够稳定存在而不被破坏。最近，有大量的基于亲和层析的分离方法出现，因为表达系统的发展可以产生带组氨酸标签的蛋白质以及融合到其他蛋白质如谷胱苷肽S转移酶或麦芽糖结合蛋白的蛋白质。组氨酸标签可以加到蛋白质N端或C端并结合到金属螯合的含有亚乙酸配体的柱子上。同样，谷胱苷肽S转移酶可以结合到谷胱苷肽配体上，谷胱苷肽配体可以共价结合到琼脂糖凝胶上。