根据它们的分子大小排阻或凝胶过滤层析

根据它们的分子大小排阻或凝胶过滤层析

     分子排阻或凝胶过滤层析
　　分子排阻法分离蛋白质是根据它们的分子大小来分离的。这种方法的原理是使液体流过带孔的珠子来分离蛋白质。这些小孔有固定的大小，是由共价的聚合体交联形成的。在不同分子质量的蛋白质混合物里有一些小到可以通过小孔，因此它们流过柱子的速度较慢。大一些的蛋白质很少可以进入小孔，它们通过树脂的过程不受阻碍。非常大的蛋白质通过“孔隙体积”被洗脱，并且不和小孔有相互作用的所有蛋白质都可通过“孔隙体积”被洗脱，这个与蛋白质的分子大小无关。流过柱子的速度反应了与小孔相互作用的程度；小的蛋白质花费大量时间在小孔内的溶剂体积里，洗脱速度远慢于只与珠子边缘发生作用的蛋白质。很明显这个过程为分离不同大小的蛋白质提供了有效的方法。
　　理想的情况下洗脱体积与分子质量的对数存在线性关系。这意味着如果一个分子排阻柱子由已知分子质量的蛋白质校准后，分子质量未知的蛋白质可以通过洗脱位置来推测它的分子质量。如果未知分子质量的蛋白质和标准蛋白的形状相似，那么可以对蛋白质分子质量进行比较精确的推测，这是因为分子排阻层析的过程对溶液中蛋白质占有的平均体积比较敏感。这个体积通常用蛋白质的斯托克斯半径表示，这个常量受蛋白质总体形状影响很大。因此，长蛋白如纤维蛋白质呈现不规则的移动速度。对分子排阻层析的严格定义应该是根据不同的流体动力学半径来分离蛋白质。现在分子排阻层析很少用来分析亚基分子质量而用来去除蛋白质中的杂物。通常用来去除蛋白质样品中的盐或把蛋白质从一种缓冲液换到另一种缓冲液中。