细胞临时涂片、永久涂片和切片技术的应用

细胞临时涂片、永久涂片和切片技术的应用

减数分裂染色体的研究    高等植物的减数分裂发生在花药组织中，有花粉母细胞以及胚珠中的大孢子母细胞。胚珠由数层营养生长的细胞包围，一个胚珠里面只有一个大孢子母细胞，所以很难观察。另一方面，花药拥有大量的花粉母细胞，所以将花药挤破就很容易看到。因此，减数分裂研究所用的材料通常为花粉母细胞。为了研究某个物种减数分裂中的染色体行为。前期工、中期I和中期Ⅱ是较适宜的时期(图18—2)。因此，需要选择适宜大小的花蕾来获得恰当的减数分裂的分裂相。研究减数分裂的方法有I临时涂片法、永久涂片法和切片法等不同方法。    1．临时涂片法(醋酸洋红染色)    (1)取蕾从一个花序上取一系列的花蕾，包括从最小的到最大的花蕾，直到找到合适大小的分裂相的花蕾。取材的时问以晴朗的白天8：0O～14：00都可。如果在田间采集花蕾．可置于醋酸与酒精之比为l：2的混合液中固定1～2d。在这种情况下，在涂片前只需转入45％醋酸溶液5～10min，固定的花蕾可贮存在70％酒精中。    (2)固定染色加一滴1％醋酸洋红于一干净无油脂的载玻片上，用解剖针从一适宜大小的花蕾上挑取2～3个花药，置于固定染色的混合液中。    (3)涂片用铁解剖刀将花药中的内含物轻轻挤出．去除杂质，盖上盖玻片，玻片在酒精灯上稍微加热，轻压盖玻片，将多余的染液挤走。    (4)观察玻片用石蜡封片．显微镜下观察。如果封片较好该玻片可在低温下保持    l～4周。    (5)永久制片采用叔丁醇法制成永久片。