蔗糖梯度溶液线粒体实验科研型光学显微镜常识

蔗糖梯度溶液线粒体实验科研型光学显微镜常识
    线粒体    大鼠肝脏和牛心脏是用于呼吸研究的线粒体的常用来源。在这些研究中，细胞器的产量并不是主要考虑的，取而代之的是方法本
身要求尽可能得快速和温和。使用良好的介质和仅3000g离心力来制备“重组分”线粒体就符合以上要求。密度梯度离心可以实现从“重+轻线粒体”组分中更完整地回收线粒体。由于蔗糖梯度溶液具有高摩尔渗透压浓度，线粒体、溶酶体和过氧化物酶体的密度范围有相当大部分的重叠。Percolr和Nycodenz以及碘克沙醇的等渗
梯度溶液提供了更优越的分辨率。Nycodenz中线粒体的密度比碘克沙醇稍高一点，因此提高了它们与较轻的溶酶体的分辨率。由于酵
母线粒体目前广泛用于许多功能和结构研究之中，实验方案4．9描述了广泛应用的这些线粒体在Ny—codenz@梯度溶液中的纯化过程。在底部上样的不连续梯度溶液中漂浮分离通常会提高分辨率，这种方法现在已应用于酵母线粒体分离。然而，观察哺乳动物线粒体发现，将粗制的线粒体组分放于梯度溶液底部时，高流体静压会导致线粒体结构的部分破裂
也可参看实验方案，该方案描述了用于从轻线粒体组分中纯化所有主要细胞器的梯度溶液。