使用低黏稠度梯度介质与蔗糖溶液相比特点

使用低黏稠度梯度介质与蔗糖溶液相比特点
     器材    除了微粒体的沉淀以外，所有的差速离心都能在冷冻高速离心机中进行。为了将小颗粒对沉淀物的污染降到最小限度(见上文)，与吊桶式转子相比更推荐使用固定角转子(管体积相同)，因为它们在凹液面和管底之间的沉降路径更小，离心力的差距也小。很明显，转子的角度越小(对于垂直方向来说)，分离的效率越高，但是小角度的另一个影响——沉淀趋于堆积得较松散，界限不明确，这是一个缺点。实际上，大约30°的转子是个折中的办法。除了沉淀细胞核(第一步)这个唯一的特例之外，都推荐使用固定角转子；倾向于在这一步中使用吊桶式转子只是由于它常规地用于低速离心机(低速离心机主要匹配于这种转子)。此外，核与下一个最大的细胞器(线粒体)之间的沉降率差距如此之大，以至于转子的种类不再那么重要了。
    密度梯度离心
    现在广泛认为，特别是对于一些可以在相对较低的离心力(1000g～15000g)下沉淀的较大细胞器(细胞核、线粒体、溶酶体和过氧化物酶体)来说，在吊桶式转子长沉降路径下以100000g以上的转速，使用黏稠、高渗的蔗糖梯度溶液，既不方便也对细胞器有潜在的伤害。因此，显著地趋向于使用低黏稠度梯度介质如Nycodenz@或碘克沙醇，这些梯度溶液与蔗糖溶液(或甚至等渗的溶液)相比有更低的摩尔渗透压浓度。尽管传统的吊桶式转子仍然被广泛地用于密度梯度离心，垂直或接近垂直转子的短沉降路径不仅减少了离心时间，也将梯度溶液中强加于颗粒之上相当大的流体静压的影响降到了最小。