悬浮于液体薄膜中未染色的生物颗粒物质玻璃化

悬浮于液体薄膜中未染色的生物颗粒物质玻璃化
    玻璃化技术    将悬浮于液体薄膜中未染色的生物颗粒物质玻璃化，辅以冰冻电子显微镜术，是一种比负染色更优越的结构分析方法。冰冻电子显微术本身有一定的技术难度，但近年来这些问题已经在很大程度上被克服了。须知那些未染色的玻璃化或者冰冻含水的标本必须在严格的低温、低电子剂量下研究，同时必须应用数字图像处理，这样才能将电子显微照片固有的对比度低的影像的结构信息复原出来。吸附于炭或平展于孔洞中的风干的负染标本，亦可以在葡萄糖或海藻糖溶液存在时，于低温下进行研究。葡萄糖、海藻糖可以为生物材料提供有效的保护，提高标本移动度或降低被支持碳材料吸收，防止标本扁平。这种低温负染色技术某种程度上比未染色标本玻璃化操作简便，可以得到约为1．5nm的分辨率，但与近年来刚刚发展起来的结合了玻璃化技术以及负染色技术二者优点的冰冻负染色技术相比，还是逊色了一些。     金属投影和冰冻断裂技术    负染色和玻璃化未染色标本的制备都使用未经固定的材料。而铂一碳或钨一铱金属投影技术要求预先固定生物材料，用蒸馏水透析的方法完全除去固定液以及缓冲盐，再吸附于云母、碳底物或重悬于挥发性盐，如醋酸铵、醋酸氢铵，常常还含有甘油的缓冲液后需进行洗涤。冰冻断裂技术、金属投影的分辨率一般低于负染色技术以及未染色玻璃化材料的冰冻显微术的分辨率，但是在冰冻干燥、冰冻断裂的样本中，金属在真空中蒸发的颗粒很匀称，得到的结果相当好。