电镜实验室现代细胞生物学研究细胞结构和分离

电镜实验室现代细胞生物学研究细胞结构和分离
    免疫标记
    在现代细胞生物学研究中，在细胞结构和分离得到的大分子中对抗原进行免疫标记显得相当重要。免疫标记技术可以在树脂包埋生物材料前／后应用(包埋前／后标记，，也可以与负染色法(详见实验方案2．3)、玻璃化法以及金属投影技术很好地结合。胶体金是连接抗体(IgG／Fab／Fab’)或者其他配体如蛋白A／蛋白G、卵白素／抗生物素蛋白链菌素(生物素化的蛋白)以及凝集素的最常用的高电子密度标记物。可以购买到的胶体金颗粒直径为1～20nm不等，可以在同一组织上利用不同大小的胶体金标记的抗体(二抗)作多重标记。包埋后最重要的是抗原性的保持。包埋后标记的一个潜在困难就是待测抗原决定簇可能经受不了在脱水、包埋之前常规应用高浓度固定剂[如3％戊二醛(体积分数)]进行组织固定。所以，2％甲醛一o．5％戊二醛(体积分数)常用于固定，它们可以保存细胞蛋白质的抗原性，但是对于组织结构的固定效果就略显不足。近来可以购买到1．4nm金颗粒(NanogoldTM)标签以及o．8nm 11金标签。这些探针可与抗体和链亲和素连接，在将来可能对高分辨率的细胞及大分子标记领域产生越来越深远的影响。    专门技术    真空镀膜术、超薄切片术、冰冻超薄切片术、高压冻存术、冷冻置换术、冰冻断裂术以及活塞冰冻术的使用都不包括在本书的范围之内，在别处都能找到完全的操作步骤，但是建议最好直接从电镜实验室的技术人员或科研人员处学习。通常在局部的统筹安排和资金的支持下，电镜实验室的工作人员会作为服务性角色向实验室的所有仪器使用人员提供相关