原绿球藻与聚球藻同时被CCD显微镜实验室

原绿球藻与聚球藻同时被CCD显微镜实验室

    理论上，对BCM的正确计数应该是以总红外阳性计数减去蓝细菌计数获得。但是原绿球藻的存在使得无法确认红外阳性计数中的总蓝细菌数。因为原绿球藻是大洋中丰度最大的蓝细菌，他也能够被CCD捕获到红外荧光，但其单细胞叶绿素含量较低，其红色荧光信号会被海水中共存的聚球藻的强红色荧光信号所掩盖，因此在曝光的最初时间内无法被CCD捕获到。根据荧光半衰期的原理，当细胞在激发光下曝光一段时间后，聚球藻与原绿球藻的红色荧光强度差别会缩小，这样原绿球藻才能够逐渐与聚球藻同时被CCD捕获到。因此，在蓝细菌的时间序列成像过程中，准确的总蓝细菌(原绿

 球藻和聚球藻)数并不是最初的图像计数，而是经过一段时间曝光后的计数。所以，每个视野的BCM的精确计算公式是：BCM细胞数一红外荧光时间序列成像时处于稳定期的红外阳性细胞数一红色荧光时间序列成像时处于稳定期的蓝细菌细胞数。TIREM方法对传统显微镜方法理念是一个冲击：在传统的落式荧光显微法或IREM法中，为避免荧光淬灭人们往往选择快速观察检测计数；而TIREM方法的实践告诉人们，时间序列的观察是获得可信数据的关键。在对BCM和蓝细菌的实验室纯培养的检测和野外海水样品的检测，都验证了TIREM法的有效性。