光学显微镜鉴定菌体经酶解后原生质体呈球形

光学显微镜鉴定菌体经酶解后原生质体呈球形

原生质体的鉴定
　　(1)光学显微镜鉴定：菌体经酶解后释放的原生质体呈球形。
　　(2)电子显微镜观察：样品经1％锇酸蒸气固定，喷金后扫描电镜观察、拍照。如用透射电镜，样品经8 000r／min离心15分钟，沉淀用2．5％戊二醛固定2～4小时，磷酸缓冲液冲洗两次，1％锇酸固定6—16h，磷酸缓冲液冲洗，30％一100％酒精逐级脱水，每级
　　原生质体活力的染色鉴定：采用FDA—PI双荧光染色法。FDA(荧光素双醋酸盐)是一种非极性化合物，能自由穿过细胞膜，进入细胞质。如果原生质体保持活性．其细胞质中酯酶活性很高，使FDA分解释放出荧光素。这种荧光素有极性．不能穿过细胞膜而积聚在细胞质中。在蓝色激发光下发出黄绿色荧光。PI(propidium iodide)不能自由穿透有生活力的原生质体的细胞膜，但能穿过受损伤的细胞膜进入无生活力的原生质体。P1在细胞内与核酸结合，在蓝色激光下发出桔黄色荧光。这样在同一视野中便可一目了然地区别出有活力和无活力的原生质体的大致比例，此方法简便易行、可靠。

　　双向免疫扩散双向免疫扩散是使抗原和抗体在同一凝胶内彼此相向扩散，相遇后形成特异的沉淀线(或叫带)。这种沉淀线对形成它的抗原和抗体是不可透过的，而对与这种抗原和抗体无关的所有其他抗原和抗体，则是可透过的。因此，两种一致的抗原或抗体从两个不同的孔扩散，当与从第三个孔扩散的它们的抗体或抗原反应时，彼此将以一定的角度形成融合的沉淀线。在同样条件下，两种无共同决定簇的抗原与它们的抗体(混合放在第三孔中)反应时，彼此将以一定的角度形成两条交叉的沉淀线。